猪丹毒QL251弱毒菌株的稳定性试验

猪丹毒ＱＬ２５１弱毒株在马丁肉汤、血液琼脂斜面、小白鼠及猪丹毒敏感猪体内连续传代后，测其安全性和免疫原性。试验证明，ＱＬ２５１无论是在培养基上，还是在动物体内传代后都是稳定的，仍然保持了原有的特性。     

Evaluation on the pathogenicity of Erysipelothrix tonsillarum for pigs by immunosuppression with cyclophosphamide or dexamethasone

The pathogenicity of Erysipelothrix tonsillarum was evaluated in pigs immunosuppressed with cyclophosphamide (CY) or dexamethasone (DM). Animals were treated with 15 mg/kg CY (n = 8, five injections), 1 mg/kg DM (n = 8, nine injections) or left untreated (n = 8). On the fifth day after the beginning of drug treatments, swine were inoculated with one of two E. tonsillarum serovar 7 strains (approximately 10⁶ CFU per pig). In the CY-treated group, both circulating neutrophil and lymphocyte counts decreased, whereas in the DM-treated group, lymphocyte counts decreased but neutrophil counts increased. During the observation period, none of the CY- or DM-treated pigs developed clinical signs or gross lesions, as well as non-treated pigs. Growth agglutination antibody titres in all pigs remained unchanged. Our findings indicate that E. tonsillarum strains are avirulent for swine, regardless of immune status.     

红斑丹毒丝菌SpaA抗原基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测

参照红斑丹毒丝菌表面抗原A（SpaA）基因的核苷酸序列合成1对引物,对我国生产用红斑丹毒丝菌CVCC43005的SpaA全基因进行了PCR扩增,扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果表明,SpaA基因全长1881bp,含有1个开放性阅读框,编码626个氨基酸。与已提交的红斑丹毒丝菌血清型1a、1b、2a、2b、5、8、9、12、15、16、17、N型的氨基酸同源性为97．5％～100％,血清型4、6、11、19、21的氨基酸同源性为52．8％～55．2％。与已提交的丹毒丝菌血清型18的氨基酸同源性为57．5％～58．0％。采用ChouFasman和Karplus—Schulz方案预测蛋白质的二级结构和柔性区域;运用Kyte-Doolittle方案预测氨基酸的亲水性,按Jame—son-Wolf方案预测抗原指数,利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性。对预测结果综合分析,推测最有可能的B细胞表位位于N端的59～64、85～91、174～186、193～201、212～215、221～231、266～275、278～288、29l～308、314～327、329～349、356～376、403～456、508～516、528～537、568～576和607～626。     

丹毒丝菌SpaA基因免疫保护区的克隆及其在毕赤酵母中的表达

【目的】以毕赤酵母Pichia pastoris X-33为宿主表达猪丹毒丝菌Erysipelothrix rhusiopathiae Spa A基因氨基端的免疫保护区蛋白.【方法】以采集于广东某猪场的猪丹毒丝菌为模板,根据NCBI中已发表的Spa基因c DNA序列设计1对引物,通过PCR扩增得到Spa A-N,并将其连接到表达载体p PICZαC上,得到重组表达质粒p PICZαC-Spa A-N;用Sac I酶将重组表达质粒p PICZαC-Spa A-N线性化后电转化入毕赤酵母X-33,经含博来霉素ZencinTM抗性的YPDS平板筛选和PCR鉴定的阳性转化子,用含不同浓度博来霉素抗性的YPDS平板筛选出高拷贝子并进行甲醇诱导培养,分别于诱导48、72、96 h后离心收集上清液,立即做SDS-PAGE,并进行SDS-PAGE及Western-blot试验.【结果和结论】成功克隆并表达了Spa A-N基因,构建了重组表达质粒p PICZαC-Spa A-N,并以毕赤酵母X-33为宿主成功表达了猪丹毒丝菌Spa A基因氨基端的免疫保护区蛋白.丹毒丝菌Spa A-N作为免疫保护区在酵母宿主中得以成功表达.     

上海市猪丹毒杆菌流行株耐药性分析

为了解上海市猪丹毒杆菌流行株的耐药状况,对上海市2011—2017年分离到的猪丹毒杆菌采用纸片扩散法(K-B法)和微量肉汤稀释法(MIC法)进行药敏试验,同时对临床分离株与健康带毒株的MIC结果进行比较。结果显示:所有菌株对β-内酰胺类和大环内酯类药物敏感,而对林可霉素、四环素类、氯霉素类、喹诺酮类等原本敏感的药物,已产生较强耐药性;对临床分离株与健康带毒株的MIC结果比较分析发现,致病菌株和健康带毒株的耐药性存在较大差异。结果表明,上海市猪丹毒杆菌耐药情况较为严峻,除对β-内酰胺类和大环内酯类药物较为敏感外,对其他药物均出现不同程度的耐药。本研究为临床合理用药提供了有价值的参考资料。